抗原修復鍋的這些注意事項要牢記
抗原修復鍋看上去像我們烹飪的高壓鍋,這是一款功能*的“高壓鍋”,主要用于抗原暴露的工作,主要的工作原理也是裝玻片的幾個分室可以達到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控制器來保持一定的溫度和壓力及一定的時間,這些工作參數都是經過嚴格的科學實驗得到的數據。當達到需要的溫度,抗原修復鍋會在該溫度下保持幾分鐘,之后鍋內玻片被冷卻2個多小時,特殊設材質的內鍋體控制了鍋和玻片的冷卻速度。
抗原修復鍋的注意事項:
1、PH值的應用范圍及選擇。
應用于抗原修復的物質很多,但至今為止,大家覺得的較好的抗原修復液還是檸檬酸鹽緩沖液PH6.0,據多年來的實踐認為,該液確實很好,它適合于大多數的抗原,在常規應用的臨床標記抗體中基本都適用,經用該液修復后的抗原表達增強,抗原的定性和定位很理想,結果不錯。
2.抗原修復時應選擇溫度。
70℃-90℃的溫度對沒有經固定的蛋白可發生變性,但經福爾馬林固定的蛋白,要使其發生變性,溫度必須在92℃↑。據實驗認為溫度在92℃-98℃是合適的,尤其在95℃為較好,這是因為:①這種溫度未達沸騰,切片不容易脫離裁片;②能夠解離和破壞與蛋白交聯的甲醛醛鍵等,處理時可以隨意選擇和確定抗原修復鍋的抗原修復作用時間。
3.抗原修復鍋工作時有效溫度所需持續時間根據各單位的設備條件以及使用的儀器不同,抗原修復時在有效的溫度范圍內所持續的時間也不一樣。例如:真空負壓抗原修復法,當達到預定的溫度和所需的負壓(66.7KPa)后可持續5-10分鐘,微波輻射抗原修復法溫度不好控制,抗原修復液容易沸騰,如果切片附貼任憑其沸騰持續5-10分鐘。如果切片附貼很牢固,為了防止脫片,一發現抗原液已沸騰,即可關掉電源,待溫度下降后,又可重開電源。如此反復數次,使之持續10分鐘。不過似這種停停開開著的做法效果不如開著的,因為開著的除了熱效應以外,還有足量的微波輻射。應用高壓抗原修復法,當發現抗原修復液沸騰后,加上壓力閥,出現噴氣后,可持續時間達2-4分鐘。隔水熱加熱抗原修復法,要特別注意內外液體的溫度,內液指抗原修復液,外指浸泡抗原修復液容器的水,應用時用溫度計浸入抗原修復液測試,使之保持在有效的溫度(92℃↑)范圍內。持續時間在40分鐘,電爐加熱抗原修復法,其持續時間在10分鐘以上。由于效果較差,該法目前較少使用。
4.抗原修復液必須遵循自然降溫規律,否則效果不好或達不到抗原修復的目的。
抗原修復持續時間過后,取出放于室溫中讓其慢慢地降溫,決不能為了爭取時間,強行用冰塊或冷水令其降溫。這是因為當高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其它的束縛或聯結,要有一個自然環境讓其自然放松下來,隨著溫度的降低,它們會慢慢地恢復原來的形態和構型。如果用冰塊和冷水強行令其降溫,松開后的蛋白分子肽鏈突遇降溫而固定下來,恢復不了原有的構型,抗原修復鍋就達不到預想的效果。